Questo studio è stato approvato e finanziato dal Ministero della Salute nell'ambito dei progetti di ricerca finalizzata (codice ricerca RF-2009-1536040). Ha ricevuto inoltre sostegno finanziario e non da Hologic Spa, Roche Diagnostics e Becton & Dickinson, che però non hanno avuto nessuna parte nelle analisi, elaborazioni, e presentazione dei dati.

OBIETTIVI
Valutare la performance dei test HPV E6/E7 mRNA (APTIMA, Hologic) and p16/Ki67 (CINtec PLUS, Roche Diagnostic) come tests di triage della positività per HPV DNA, in confronto con la citologia cervico-veginale.
Misurare la potenziale riduzione della sovra-diagnosi con l’introduzione di un triage citologico o di un triage con mRNA o p16/ki67 rispetto all’invio diretto alla colposcopia per le donne positive al test HPV DNA
Misurare la detection rate cumulativa di lesioni cervicali intraepiteliali di alto grado CIN2 o più grave (CIN2+) nei cinque anni a seguito di un test HPV DNA positivo e di un biomarker, p16/ki67 o mRNA, negativo.
Successivamente si è aggiunta la valutazione della genotipizzazione tipo specifica nel triage e nella valutazione del rischio per CIN2+ sia trasversale che longitudinale

DISEGNO DELLO STUDIO E METODI
Questo studio multicentrico è un studio clinico randomizzato a due bracci che ha coinvolto cinque centri di screening italiani (Torino, Firenze, Veneto, Umbria e Trento). Il test HPV-DNA (Cobas 4800, Roche Diagnostics, oppure Hybrid Capture 2, Qiagen) è stato eseguito presso i laboratori dei centri di reclutamento. Il test HPV mRNA (APTIMA, Hologic) è stato centralizzato presso i laboratori di Firenze e di Torino. Il test immunocitochimico per p16/ki67 (CINTec PLUS, Roche Diagnostics) è stato eseguito in quattro centri (Roma IFO, Firenze, Umbria e Torino) ed è stato interpretato in sette centri, di modo che ogni vetrino ha avuto tre interpretazioni da tre differenti laboratori. Tale disegno ha permesso di valutare la concordanza di interpretazione sia per l’adeguatezza che per la positività del test e di studiarne i determinanti. Le donne HPV-DNA negative sono state inviate a ripetere il test dopo 5 anni. Tra le donne negative al test HPV-DNA, solo un campione random di 1000 donne è stato testato con il test mRNA per stimarne la specificità. Le donne HPV positive hanno avuto un pap test come test di triage, secondo le linee guida italiane ed europee, e i test mRNA e p16/ki67 sullo stesso prelievo cervico-vaginale. In caso di citologia positiva (>=ASC-US), le donne sono state inviate a colposcopia immediata. In caso di citologia negativa è stata effettuata la randomizzazione in due bracci, uno con invio diretto in colposcopia, l’altro con ripetizione dei test HPV-DNA, mRNA e p16/ki67 a un anno. Le donne negative nel gruppo follow up sono inviate a 4 anni di follow-up, le donne positive sono inviate alla colposcopia. La gestione delle colposcopie, il trattamento delle lesioni CIN2+ e l’eventuale follow up post-trattamento seguono le linee guida nazionali. Le donne saranno seguite fino alla fine del periodo di studio (round di screening successivo) o fino al rilevamento di una lesione CIN2+.
Recentemente, utilizzando il materiale biologico conservato nella biobanca dello studio, abbiamo genotipizzato tutti i campioni HPV-DNA positivi al baseline e al follow up ad un anno, e un set di campioni HPV-DNA negativi.

RISULTATI
Il reclutamento è iniziato nel 2013 e terminato nel 2016. In totale sono state reclutate 41127 donne di età compresa tra 25 e 64 anni che hanno aderito allo studio firmando un consenso informato. In totale sono state riscontrate 3180 donne positive al test HPV DNA (7.7%) e sono state diagnosticate 176 lesioni CIN2+. Abbiamo pubblicato i risultati della valutazione dell’accuratezza al baseline dei biomarcatori rispetto alla citologia e della valutazione della sovra diagnosi di CIN2+ ad un anno (Giorgi Rossi P. et al. JNCI 2021). Abbiamo concluso lo studio sulla riproducibilità dell’interpretazione di p16/ki67 da cui sono scaturite tre pubblicazioni (Benevolo M. Cancer Cytopathol 2017,2020 e 2021). Abbiamo valutato il test mRNA Aptima come possibile test primario di Screening (Int J Cancer 2022). Stiamo attualmente valutando la genotipizzazione tipo-specifica sia dal punto di vista tecnico, confrontandone i risultati con quelli di altri tests, sia nel triage per migliorare l’efficacia e l’efficienza dell’algoritmo di screening (De Marco L. submitted Microbiology Spectrum 2024; Benevolo M. in press Ebiomed 2024)

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